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一點一點流光(中西兩翻雙書封設計)
為了解決化工系 PTT 的問題，作者洪丹 這樣論述：
這次，他要當一個老實人，和你一起誠實面對自己的不完美，在你耳邊傾訴所有的不堪…… 同時，他要當你的引渡人，聆聽你的悲傷，點亮你的心房…… 你還記得那則虎姑婆一口吃掉加班的父母的都市傳說嗎？你還記得重聽女神獎勵搞丟鐵斧的樵夫加班時數的故事嗎？你還記得哪一個東西會莫名變長嗎？是鼻子？小矮人？還是工時呢？ PTT鄉民推爆，一位集文學素養以及幽默風趣於一身的詩壇新星──「哭叟詩人」洪丹，將顛覆你對詩的想像！ 他關心婚姻平權、關注勞工議題、反思宗教信仰、傾訴情感的得與失，同時也擅長用諧音竊取你的笑容。這次，洪丹不只要當一個說童話故事的人，還要當一名諧音詩情人，帶領大家找到生
活中一點一滴的流光，以及黑夜中那一明一滅的星光。 你可以在充滿光明的童話裡，挖掘出幽微的深意與現實生活的赤裸呈現；你也可以在看似絕望的詩句中，找尋到從石縫中透出的光點與被理解的寬慰。 由流洩光光的入口進入，你將會發現，這個世界不是只有你的內心是如此黑暗無光…… 由波光熠熠的入口進入，你將會從此相信，這個世界不會傷害你…… 在不知道盡頭是有光還是無光的你，敢走進去嗎？ 本書特色 ★PTT鄉民推爆！＜勞工童話＞作者洪丹首部詩集強力問世！ ★中西兩翻雙書封設計，有「波光熠熠」和「流洩光光」兩面設計，你可以從無光的入口進入，漸入佳境；也能從有光的一側進入，慢慢走至無光
之地…… 名人推薦 ★詩人 徐珮芬、作家 陳茻 專文推薦 ★作家 文字慾、作家 朱宥勳、瘋狂搖滾傳教士 朱頭皮約信、想想論壇作家 江昺崙、詩人 宋尚緯、清大中文系兼任講師 李威寰、《妖怪臺灣》作者 何敬堯、詩人 李豪、《讀古文撞到鄉民》作者 祁立峰、寫真的 林季鋼、詩人 林夢媧、作家／譯者 林蔚昀、熊與貓咖啡書房創意總監 林德俊、空職工理事 林馨怡、詩人 段戎、青年詩人 洪崇德、政治／新媒體工作者 苗博雅、作家 神小風、作家 追奇、詩人／臺大中文系副教授 唐捐、詩人 夏夏、詩人 陳令洋、北科大化工系助理教授 崔宏瑋、彰化高中教師／作家 陳育萱、世新大學社發所教授 陳信行、牧師 陳
思豪、詩人 郭哲佑、大學兼任講師 張純昌、作家 盛浩偉、詩人 張詩勤、媽媽詩人 游書珣、基督徒性別平權運動者 喬瑟芬、詩人 寒鴉、作家 溫如生、只要有人社群顧問總監 葉家瑜、詩人 楚影、詩人 銀色快手、沒用的詩人 瞇、地球公民基金會副執行長 蔡中岳、詩人 蔡仁偉、臺灣神學院教會歷史學教授 鄭仰恩、詩人 潘家欣、詩人 鄭哲涵、作家／教師 歐陽立中、詩人 蔣闊宇、歷史作家 謝金魚、政大中文系兼任講師 謝獻誼、美女詩人 羅毓嘉、詩人 騷夏、justfont 共同創辦人 蘇煒翔 「諧力」推薦 好評推薦 所有信以為真的，那些美麗的欲望，都在詩的諧音裡，一點一點，流光，那些光，不在眼眶打轉，便成心
願。 在洪丹的詩裡，詼諧與寂寞，字與字之間，有時會發現，一個世界。──作家 文字慾 喔 這個是 詩集 耶 那 我也來寫個詩 回敬 好 了 讀一讀讀一讀 洪丹的詩很多我們身邊的事 好像很多講到愛情 那 我來寫個 身邊的愛情事 ### 我知道你是愛我的 因為你隨身攜帶葉克膜 有時我快死了 有時我活蹦亂跳 你都適時將葉克膜插入我的體內 我知道你是愛我的 你說葉克膜可以讓我活比較久可以保鮮我的器官可以賣比較好的價錢 我死了後這筆錢都歸你 你知道我是愛你的 如果是愛家公投人士 由於是主內弟兄姊妹
我們可以算便宜一點 約為外國人價格的一半 ### 這詩好像也蠻適合放入這本詩集 ### 這詩好像不適合放入這本詩集 ──瘋狂搖滾傳教士 朱頭皮約信 洪丹作為知識（滋事）分子，擅長以諧音笑話，將網路哏拼成了當代社會的預言、欲言與寓言（還是浴鹽？）創造議題，諸如性別平權、勞工議題的同話，或者童話。在一次針心推薦。──想想論壇作家 江昺崙 如果你後悔曾經放蕩卻懷念年少輕狂，如果你想跟同性結婚或與伴侶和解，如果你愛到卡慘死、加班沒加薪，如果你自備環保筷、充滿童情心，如果你是異端基督徒、半路殺出工程師，本書保證讓你笑中帶淚，請一定要看。昺崙，再啦幹！──清大中文系兼
任講師 李威寰 活著就是一齣悲喜劇，被逼妥協，被逼變成活屍，漸漸活得失去知覺。洪丹卻以幽默為矛，狠狠刺穿這世界的假面，讓滴落的淚水滌淨疲憊的心魂。我在詩裡不是讀到行屍走肉的末日，而是有人相陪的黎明。──《妖怪臺灣》作者 何敬堯 「獅潭」早有諧音詩，看似惡趣卻刺入語言延異的繁華密境。詩有可解有不可解，有美刺晦澀或直陳。除了莊諧的逸趣，《一點一點流光》更歪打正著符應《詩經》〈詩大序〉傳統，抒下情而通諷喻。《文心雕龍》的〈諧讔〉一篇，如今成了「諧音」一體，猶如那瘋轉的歌詞：「我以為我會暴富／可是我沒有」，由後視前，令人玩味。──《讀古文撞到鄉民》作者 祁立峰 詩歌不總是只能抒情，洪
丹藉著挖苦、詼諧、諷刺等等方式，來翻轉我們習以的日常，讓我們意識到他透過詩歌的異識來議事，他是義士抑是一杯義式，有點苦澀卻令人醒腦。在這情理易逝的異世，謝謝他仍在書寫軼事，讓我們的流光，不會一點一點流光。──寫真的 林季鋼 在崩壞前守住支撐自己的骨架，但不要害怕他們一點一點流光。在黑暗中找到自己的影子，找到等待自己的，一點一點流光。──詩人 林夢媧 洪丹像是那個大喊「國王沒有穿衣服！」的小男孩，用他的詩，讓現實的虛偽一點一點流光，餘下生命的歡樂或悲傷，如流光（或鹽水蜂炮）般散落。──作家／譯者 林蔚昀 勞工是我心底最軟的一塊，結果是最軟的那一塊，肉呢！虎姑婆笑瞇瞇的。近年勞基
法兩度修惡，勞工休息時間越來越少，要合理的休息時間能用來愛人與被愛，找尋夢想擁有未來，有一天，期待虎姑婆不會吃掉勞工們的孩子！──空職工理事 林馨怡 要拿一件事情比喻洪丹的詩，我會說像美國流行的「meme」（哏）。諧音笑話、偶爾廢哏，諷喻時事，讓人無言又上癮，不小心一個下午就泡在裡面了。出來的時候身上的水滴還很難乾。──詩人 段戎 對於有光與無光並存的意象，在這本詩集裡面，發揮得淋漓盡致。讀洪丹的詩，很常讀著讀著，嘴邊勾起一抹笑，卻又瞬即在笑裡感受到如刀刺穿的楚痛。這種充滿趣味、調侃、諷刺的生活語彙，在他的精心安排下成為五味雜陳的詩，哭笑不得，十分過癮。──作家 追奇 名門出
了奇葩，出手都是怪招。他鑽進語音、語義、語法的隙縫，取得獨特的原料，織成神奇的斗篷。你看他穿梭於廟堂與廣場之間，以機鋒，以內力，以詼諧，踹翻了那些老大顢頇者的門面，傳達庶民的心聲。這樣的詩是踐履性的，訴說即是行動，好笑所以有力，健步如飛，深情可感，蘊含著「我們這個時代」最火熱的聲音。──詩人／臺大中文系副教授 唐捐 詩人洪丹有如童話中誠實的孩童，大膽拆穿「國王的新衣」，用直率的文字將我們熟悉的寓言故事偷渡成現實的幻境，將現實的荒謬透過詩意的語言讓人得以直視。──詩人 夏夏 諧音哏、政治哏、時事哏都是最難一ㄎ永流傳的笑話，但洪丹傾一本詩集的力量給它們過肩摔，碰！狠狠地摔出一堆詩意，令
人不禁讚嘆：才華就應該這樣浪費，不浪費不足以顯其富有。真想開他紅單！──詩人 陳令洋 過去幾十年的臺灣，一句話就能讓人心肝結球的寫手，多半靠著幾種行當在過活：廣告文案、心靈雞湯、失戀歌詞。從而，雖然受雇者被糟蹋的鬱卒已經成了眾人共享的日常心情，但是，除了工運論述口號之外，還真沒什麼有滋味的字句能簡練表達這種賭爛。苦勞們只好下班後去KTV嘶吼幾條失戀歌來稍稍解氣。二○一六年起的勞基法修法鬥爭中出現的、使用各種媒材的新一代創作者，像寫詩的洪丹，扭轉了這種失語狀態。雖然勞方最終輸了法條，卻贏得了自己的豐富聲音。福氣啦！──世新大學社發所教授 陳信行 這是個比Simon and Garfu
nkel 吟唱時，還要貧瘠的年代。 人們談話著，卻不是言說；人們張開耳朵，卻沒有聆聽；人們寫著歌，卻毫無心神迴響的曲調。莫說攪動驚擾，人們根本不曾覺察到the sound of silence。 因此，誠心分享給你，洪丹，其詩、其心、其了然，《一點一點流光》，一種屬於沉默的聲音。──牧師 陳思豪 洪丹的詩沒有知識分子那種令人望而生畏的視角，詩集裡出現的是「澳門首家線上賭場」「周星馳」「旅蛙」「循利寧」等等，以及種種富時代意義的諧音戲謔，記錄臺灣年輕人的生活姿態。在現代詩彷彿開始「復興」的臺灣，我想我一直在等待這樣的一位詩人，他的詩將成為我們往後的鄉愁。──詩人 郭哲佑 洪
丹把生活中一切好笑的、無聊的微小話語，用詩意打磨、拋光，那留下失去前記憶、回到相遇時場景的溫柔願望，讓我們的不堪竟有著靈光。讀著他的諧音笑話，你會遇見那詫異的轉折背後，一顆悲傷易碎的心。──大學兼任講師 張純昌 笑著笑著就哭了，但哭著哭著又笑了。讀完詩集，讓人對文學再燃起興趣，讓人對追求公義又充滿力量。這既是正義的詩學，也是詩學的正義。──作家 盛浩偉 總有人該挺身而出，將詩端上街頭，被更多人看見。這些詩或許令人發噱，看起來不太正經，但你卻不得不承認，詩就此進入了你的心──洪丹正是這樣一位詩人，一位詩的街頭藝人。──媽媽詩人 游書珣 因為同為支持婚姻平權的基督徒，而認識了洪丹
，相識起就知道他熱切於社會正義，常與陳思豪牧師一起出現在街頭，也常看他以幽默的詩句，寫下自身的情感、對社會的諷刺與期許，讀畢總是笑中帶淚。很榮幸看到他的詩集出版，願這一點流光，流入每個需要的心靈，以微光，照亮孤單的人的。──基督徒性別平權運動者 喬瑟芬 洪丹的詩句中除了笑鬧，更多的是他心底的溫暖，他寫詩、他說諧音笑話，只為了讓你知道，他感受了你的痛苦，也讓你知道，無論生命再多磨難，也有人勉力讓你Don’t失笑頻。──只要有人社群顧問總監 葉家瑜 在很多年前，我就明白洪丹的文字甚好，只是我沒想過，會以推薦的形式與他重逢。命運也者，太多出人意料，或許洪丹正是深知如此—即使惘然雖在，只要
藉由一點一點地寫詩，終究不勞青鳥探看，進而懂得流光的意義。──詩人 楚影 這是人在窘途的恨情歌，有世態炎涼的喟嘆，也有愛不對人的荒謬離奇，有苦情的內心戲臺詞，有搞笑歡樂的動物性感傷，也有擲不出正確骰子那種徬徨和迷惘，宛如流螢秋光的語字，沿著城市邊緣把黑暗的窗一個一個點亮。──詩人 銀色快手 一點一點流光，剛開始覺得這名字真文藝，後來才想到是一點一點流光。流光很美，流光很悲悽。名字很美，讀了卻忍不住說北七。可是北七，又有一點悲戚。──沒用的詩人 瞇 環境、土地、勞動、正義，那些我上街吶喊的口號變成洪丹的詩，那些我寫的嚴肅聲明稿與投書成了洪丹筆下的詼諧嘲諷與勸世，但，通常沒人聽我
的，所以這個時代需要洪丹這樣的倡議者。──地球公民基金會副執行長 蔡中岳 縱使諧音創作在近幾年來流行得有些氾濫了，洪丹卻能在一片機智與詼諧中，摻進一點點別人所鮮有的溫柔。哪怕溫柔是落魄的，看似玩世不恭的他，仍懷抱著對這世界的愛，而且愛得很深很深。──詩人 蔡仁偉 我和洪丹是籃球場上的隊友。在球場上，看他左突右闖，撕裂對手防線；在球場下，他總愛說諧音笑話，頓時有種違和感。是的，在他身上，違和的事還多著呢！他讀中文系，後來去當工程師，本該寫程式的手，不知道為什麼，卻寫出了一本詩集來。你可以把《一點一點流光》當成諧音笑話，或者世道奇聞，但別忘了，他的本質是詩集。洪丹寫盡那些無光之所，讓你
讀著讀著就哭了；但你也從他的文字，看見無光之所的盡頭，彷彿流洩著熠熠波光。這回，你讀著讀著就笑了。相信我，這是一本你絕對不容錯過的「詩悲秀」詩集。──作家／教師 歐陽立中 洪丹的詩作中同時存在兩條音軌，在笑鬧中憂慮著，在悲傷中戲耍著，藉此獲得另種超脫。用拼貼、諧擬與笑鬧來抵擋人世的不堪，反倒展演了後現代情境裡的特殊悲壯，在這喧騰、破碎、表面的社會裡，看似樂天，其實逆向而行。十幾年過去，洪丹又帶我回頭看見李商隱的古典深情，看見身為現代人的快樂，看見當初那位無畏又好笑的少年，縱使早已被時間帶走，回想起來卻一直在那邊。──詩人 蔣闊宇 初讀洪丹處女作，總為幽默雙關的文字及辛辣敏感的取材而
會心一笑。但細讀之際卻見在歪斜作弄背後有著淺淺深深的哀愁，像是作者常用「你／我」對舉敘事；「你」固不必是某人，而「我」亦非必為作者，於是那些傾斜詼諧不如說是一種對平衡的尋索，在每個混亂不堪的時代裡，總有斯人提醒著期許光亮或者如何不那麼晦暗。這份追探之情與後續開展，就請一起試讀《一點一點流光》。──政大中文系兼任講師 謝獻誼 「最快樂的笑，往往最為悲哀。」不知為何讀著這本詩集的時候，腦海裡不斷浮出這句話。詼諧與幽默已經是我們對抗這世界所有惡意的唯一武器了嗎？如果是，洪丹的詩集正好給了我們那樣的勇氣；而如果不是，最為幸運的我們，也還有這些詩。──美女詩人 羅毓嘉 中文系出來不寫詩要幹嘛
？但反正學長最後也是跑去當 Java工程師了。右手寫程式，左手寫詩。感性中見理性，沒選錯行，真是：不誤正業。很推薦這些佯裝成廢文的臉書詩。──justfont 共同創辦人 蘇煒翔 ★好評連連，「針心」推薦！ 這是一本特立獨行的詩集，比起散場的電影院、咖啡杯緣的唇印和哭濕的枕頭，我們更常看到的是綺夢、ㄧㄡˇ ㄧˊ和一劍浣春秋。對我來說這是很厲害的事情。──詩人 徐珮芬 我原也以為，世間所有的詩，都是情詩，而洪丹的情詩有生命裡的無聊瑣事，一不小心卻可能是某段青春日子的全部。──作家 陳茻 我在詩裡不是讀到行屍走肉的末日，而是有人相陪的黎明。──《妖怪臺灣》作者 何敬堯
詩有可解有不可解，有美刺晦澀或直陳。除了莊諧的逸趣，《一點一點流光》更歪打正著符應《詩經》〈詩大序〉傳統，抒下情而通諷喻。──《讀古文撞到鄉民》作者 祁立峰 洪丹藉著挖苦、詼諧、諷刺等等方式，來翻轉我們習以的日常，讓我們意識到他透過詩歌的異識來議事，他是義士抑是一杯義式，有點苦澀卻令人醒腦。──寫真的 林季鋼 這種充滿趣味、調侃、諷刺的生活語彙，在他的精心安排下成為五味雜陳的詩，哭笑不得，十分過癮。──作家 追奇 這樣的詩是踐履性的，訴說即是行動，好笑所以有力，健步如飛，深情可感，蘊含著『我們這個時代』最火熱的聲音。──詩人／臺大中文系副教授 唐捐 詩人洪丹有如童話中
誠實的孩童，大膽拆穿「國王的新衣」，用直率的文字將我們熟悉的寓言故事偷渡成現實的幻境，將現實的荒謬透過詩意的語言讓人得以直視。──詩人 夏夏 在現代詩彷彿開始「復興」的臺灣，我想我一直在等待這樣的一位詩人，他的詩將成為我們往後的鄉愁。──詩人 郭哲佑 讀完詩集，讓人對文學再燃起興趣，讓人對追求公義又充滿力量。這既是正義的詩學，也是詩學的正義。──作家 盛浩偉 相信我，這是一本你絕對不容錯過的「詩悲秀」詩集。──作家／教師 歐陽立中 詼諧與幽默已經是我們對抗這世界所有惡意的唯一武器了嗎？如果是，洪丹的詩集正好給了我們那樣的勇氣；而如果不是，最為幸運的我們，也還有這些詩。─
─美女詩人 羅毓嘉
探討不同發酵策略對於Klebsiella sp. Ana-WS5生產1，3-丙二醇與2，3-丁二醇之影響
為了解決化工系 PTT 的問題，作者李芳慈 這樣論述：
探討不同發酵策略對於Klebsiella sp. Ana-WS5生產1，3-丙二醇與2，3-丁二醇之影響研究生：李芳慈指導老師：顏宏偉摘要--本研究為探討利用不同碳源培養Klebsiella sp. Ana-WS5以同時生產2，3-丁二醇（BDO）和1，3-丙二醇（PDO），並嘗試利用不同發酵控制增加BDO與PDO之生產濃度。根據搖瓶批次實驗的結果發現，以甘油 (70 g/L)為單一碳源生產BDO (21.7 g/L)與PDO (10.3 g/L)的效果較佳；以粗甘油 (70 g/L)為單一碳源時，會使菌體濃度下降 (2.2 g/L)，但其培養基經發酵後pH均能維持高於5.0，有助於PDO合
成 (14.9 g/L)；而以相同濃度的混合碳源 (甘油與葡萄糖，濃度分別為50 g/L、20 g/L)反而會導致BDO (5.9 g/L)與PDO (2.1 g/L)產物濃度下降；先前的文獻指出，培養基中添加醋酸有助於BDO的生產；本實驗研究結果發現添加乳酸具有類似醋酸添加的效果，亦可以提升同時生產的BDO與PDO，並且添加10 g/L的乳酸能有效地提升30 %的Total Diols產量 (30.8 g/L至39.4 g/L)。包埋法固定化細胞培養，凝膠球粒徑較小 (1.3 mm)有助產物的生產；不同凝膠球顆粒數因為pH過低的影響，無明顯的差別；重複批次實驗可以有效的重複三次，BDO和PD
O均能維持約20 g/L、11 g/L；連續式放大培養BDO、PDO生產速率分別是0.27 g/Lh、0.20 g/Lh，產率分別為0.29 g/g、0.54 g/g。細胞固定化對產物的生產沒有特別的提升效果，但有利進行重複批次實驗。不同溶氧量對菌體生長及BDO與PDO生產也有不同影響，高溶氧批次發酵，有助於菌體生長 (2.8 g/L)、提高BDO的濃度 (30.1 g/L)、生產速率 (0.42 g/Lh)、產率 (0.43 g/g)；低溶氧批次發酵反而有利於PDO的生產，提升PDO濃度 (17.2 g/L)、生產速率 (0.13 g/Lh)、產率 (0.59 g/g)。固定pH 7.0的策
略，能單獨提升PDO的最大濃度 (25.0 g/L)、生產速率 (0.33 g/Lh)約為控制組 (無pH調整)兩倍之多；雖然在探討固定時間間距調整pH (12 hr、24 hr)之批次策略無法有效提升BDO及PDO之最大濃度，但相對於控制組生產速率方面卻有大幅度的增加，BDO (0.21 g/Lh)、PDO (0.42 g/Lh)；固定時間間距調整pH (24 hr)之間隔式饋料批次策略皆在Total Diols的最大濃度 (74.3 g/L)、反應速率 (0.83 g/Lh)有相當的提升，連續式饋料能改善間隔式饋料產物延遲生產的問題，但對產物的生產沒有明顯的影響。氣舉式發酵槽具有較好的溶氧
速率且無機械攪拌葉片之剪切力的產生，相對於攪拌式發酵槽，有利於菌體的生長 (3.0 g/L)與BDO (22.2 g/L)的生產。總結，本次研究結果顯示，以Klebsiella sp. Ana-WS5 生產BDO和PDO對於發酵液中溶氧量、pH的變化、發酵槽型式是相當敏感的，細胞固定化培養則有利於重複批次實驗。此外，乳酸添加、溶氧的改變、固定時間間隔調整pH之饋料批次實驗皆是簡單又有效的方式作為提高BDO和PDO生產的發酵策略。關鍵字：2，3-丁二醇、1，3-丙二醇、乳酸、pH、溶氧量一、緒論1-1 前言當今石化能源涵蓋了生活中的食衣住行，石化能源與現代人類生活已密不可分。人口的急速增加、工業
科技的快速發展導致對石化能源的需求量高度成長。國際能源情勢方面，於二十一世紀中石油、天然氣、煤炭等石化燃料即將枯竭，但人類的需求量仍然持續增加，因此價格也不斷攀升。而高度依賴石化能源，對地球環境也帶來極大影響，例如溫室效應、全球暖化、海平面上升等，因此開發替代再生能源將成為全球關注的議題之一。全球石化燃料的日益短缺、價格飆漲，受限於此天然資源的問題，非石化原料來源的綠色化學品，將是未來重要的化學品來源。因此利用微生物發酵法生產化學品已逐漸引起關注。1-2 研究動機本研究所使用的菌株Klebsiella sp. Ana-WS5為能同時生產2，3-丁二醇（BDO）和1，3-丙二醇（PDO），故利用
不同的碳源與不同的發酵策略對於產物BDO與PDO的分布進行一連串的研究，所使用的發酵策略有(1)溶氧、(2)固定pH、(3)固定時間間距調整pH。另外，文獻指出於培養基中添加醋酸、乙醇能有效提升產物產量，本研究則為添加亦為副產物的乳酸，以觀察其對產物的影響。為了有效地重複使用微生物細胞，利用載體為海藻酸鈉之包埋法進行細胞固定化，並探討不同固定化條件對於產物生產的影響。二、文獻回顧2-1 BDO介紹BDO的開發起始於1906年，由Harden和Walpole首次利用微生物轉換法以Klebsiella pneumonia生產 (Harden and Walpole, 1906)。如今石化燃料的短
缺，石油價格不斷的上升，以微生物發酵法生產BDO再次受到重視。BDO，C4H10O2，分子量90.12，無色結晶固體或黏稠液體，溶點23~27 ℃，沸點179~182 ℃，密度為1.05 g/cm3，燃燒值為27198 J/g，能溶於水、醇和醚類。BDO應用相當廣泛，應用範圍有燃料、化工、食品、燃料、醫學、交通等多種領域中。例如BDO具有高燃燒值，是一種極具價值的液體燃料可以作為航空燃料；具有較低凝固點的特性可用作抗凍劑。另外，也可以應用於化妝品、香水、藥物載體、染料、印刷油墨、炸藥等 (Garg and Jain, 1995；Syu, 2001)。目前的生產BDO主要分為兩種方法，一是化學合
成法，但化學合成法有其缺點為必須在高溫高壓高單價觸媒的環境下進行合成，成本較高，又因BDO結較為複雜，相對的困難度也會提升。而用微生物發酵法來生產BDO，其優點為操作會比較簡單，且可以利用工業廢料當成營養源，成本也會降低，亦符合現在所提倡的綠色化工，所以微生物發酵法是現在生產BDO較受歡迎的方法 (Wong et al., 2012)。2-2 PDO介紹 PDO是已知最古老的發酵產物之一，它早在1881年由August Freund以Clostridium pasteurianum加入含有甘油的混合培養基發酵生產而得的中間體化合物，一種可直接利用微生物轉化合成之非石化來源之綠色化學品 (B
iebl et al., 1998；Reimann et al., 1998)。PDO，分子式C3H8O2，分子量76.09 ，無色或淡黃色的黏稠液體，略有刺激的味道，溶點-32 ℃，沸點214 ℃，密度為1.053 g/cm3，與水、乙醇、丙酮等多種溶劑互溶。PDO具有良好生物降解性，且不具毒性，是一種重要化工和醫藥中間體原料，可廣泛應用於多種不同產業領域，如高分子、化妝品、食品與醫藥等產業。同時PDO，更是合成新型聚酯—聚對苯二甲酸丙二酯（PTT）的主要單體之一，如圖2-3，PTT具有許多獨特的性質，因此受到國際的廣泛重視 (Biebl et al., 1999；Kurian, 2005)
。生產PDO目前有兩種方法，分別為化學合成法和微生物發酵法。化學合成法，缺點是副產物多、選擇性差、操作條件需高溫高壓、所利用的化學原料均為不可再生的石油或煤碳資源；而微生物發酵法，選擇性高、操作條件溫和、原料可用再生的農產品或工業廢料粗甘油等符合可持續發展的需求，所以越來越受重視。2-3 BDO與PDO代謝路徑圖一為微生物發酵的代謝路徑圖。由圖可發現以甘油為碳源時，代謝產物包含PDO、BDO、乙醇、醋酸、乳酸、琥珀酸，其中PDO通常是甘油發酵的主要產物。研究指出，利用Klebsiella sp.進行甘油發酵的期間，隨著pH減少醋酸的形成會被BDO形成所取代，使得BDO也成為較為主要的產物之一
。圖2-1 產物代謝路徑圖2-4 細胞固定化介紹微生物固定化技術使利用物理或化學程序將微生物定位於特定空間區域中，並使其保持活性，可維持較高的菌體濃度及加快生產速度 (Idris et al., 2006)。具有反應速度快、不易受汙染、產物分離容易、穩定性高、可重複利用等優點。依照固定載體和作用方式不同可分為五種類型:吸附法、交聯法、包埋法、包覆法、共價鍵結法。微生物最常用的方法為包埋法，是將微生物置於天然高分子多醣類或高分子凝膠中，使微生物固定化。其優點有成型方便、對細胞活性影響小、可以製作成各種形狀等 (Sun, 1998)。載體材料的選擇對微生物固定化發酵也是非常重要的因素，理想的固定
化載體應該為穩定性高、對微生物無毒性、質傳性能良好、不易被微生物分解、機械強度高、使用壽命長、價格低廉等。目前，微生物發酵最常使用的固定化包埋法使用的載體材料有瓊脂、海藻酸鈉、聚乙烯醇、聚丙烯醯氨、聚乙烯乙二醇、具丙烯酸等凝膠。其中，海藻酸鈉是由褐藻提取的多醣，故其價格低廉、生物相容性良好且固化、成型方便，是目前使用最廣、研究最多的固定化載體。2-5 影響BDO、PDO產量因素(1) 溶氧量發酵液中的溶氧濃度對微生物的生長和產物BDO、PDO的形成有著重要的影響。在發酵過程中，菌體必須要有適當的無菌空氣才能繁殖和累積代謝物，不同菌種生長、不同代謝路徑所需要的溶氧量都是不相同的，所以研究反應
器內溶氧量對發酵的影響及對代謝產物生產效率、產量是非常重要(Zhang et al., 2007)。Klebsieblla sp.為兼性厭氧菌，由上述可知在好氧和厭氧條件下分別利用兩種不同的途徑代謝甘油能分別得到其主要的代謝產物，在好氧的條件下，甘油代謝由3-磷酸甘油操縱子 (glp)調控；甘油在依賴ATP的甘油激酶催化下磷酸化，生成3-磷酸甘油，3-磷酸甘油在甘油脫氫酶作用下轉化為磷酸二羟丙酮進入酵解途徑，進而生成BDO；在厭氧條件下，甘油的代謝主要由二羟丙酮 (dha)調控，分別為氧化和還原兩條途徑，在氧化途徑，甘油在依賴NAD+的脫氫酶的催化下脫氫轉變為二羟丙酮，二羟丙酮在二羟丙酮激酶的
作用下磷酸化為磷酸二羟丙酮，進而進入酵解途徑生成BDO、乳酸、甲酸、乙醇等代謝副產物。在還原路徑中甘油則是以在甘油脫水酶的作用下轉變為甘油3-羥基丙醛，然後利用氧化還原途徑生產的NADH，在依賴於NADH的1,3¬-PDO-NAD氧化還原酶的作用下生成PDO。GDHt是催化甘油轉化生成PDO代谢途徑中的關键限速酶，因此，後續將可以使用GDHt之酶活性監測不同發酵策略對PDO合成的影響(Wong et al., 2011)。(2) pH發酵液的pH值對BDO、PDO生成途徑的影響作用是非常大的。這是因為BDO生產是一個多副產物的途徑，每種副產物生成途徑的相關酵素最適合的pH並不一致，因此發酵過
成中pH不僅會影響細菌的生長還會影響細菌的代謝過程。微生物以甘油為碳源發酵生產PDO的過程中，經由pH的控制策略可以有效的增加甘油的轉化率和控制副產物生產。目前PDO的發酵生產主要都採用間歇性的發酵過程，隨著甘油濃度的降低及產物PDO的累積，使菌體的生長速度逐漸緩慢，產生嚴重的產物抑制效應 (Ji et al.,2007)。所以可以利用發酵過程中pH的波動加上分批饋料的方式，因為發酵過程中當PDO逐漸增加時，菌體生長的環境也隨著改變，以至於菌體的生長速率下降，使副產物的產量隨之增加，所以將pH維持於中性可以維持菌體的生長速率，也可以降低副產物的大量產生。所以運用此策略可以提高PDO的最終濃度、
提高甘油的轉化率、抑制副產物的生產。無控制pH值的發酵過程中24小時內的pH值自然地快速下降至低點，此過程pH值差約3.5~4.0，此pH的快速下降是由於BDO和酸類的生成。強迫pH值的波動之方法是利用固定時間間距調整pH值，然而發酵液會自發性的降回低點，使發酵過程中能模仿自然發酵中的pH值變化，pH值能於明確的時間間距中不斷震盪。此新方法可以有效的提升BDO和PDO的生產及增加甘油的利用率(Petrov et al., 2010)。本實驗將於固定時間間距 (12 hr、24 hr)將pH值調整至7.0以觀察BDO和PDO之生產變化。(3) 添加醋酸、乙醇的影響文獻曾提出在發酵液中添加醋酸、
乙醇可以有效的提升甘油的利用率和BDO產量的提升，由圖2-1的甘油代謝路徑圖可以發現甘油經由甘油脫氫酶催化作用後可以代謝出BDO、琥珀酸、乳酸、醋酸、乙醇等代謝產物，因此在發酵液中各別添加副產物少量醋酸、乙醇，發現能在甘油代謝過程中產生產物抑制效應，使碳流減少利用於生產此兩種副產物，進而有效利用於BDO的生產 (Zeng e tal., 1990)。本次實驗也是利用此原理，在發酵液中添加亦為副產物的乳酸並測試添加不同濃度的乳酸對BDO與PDO生產的影響。三、材料與方法3-1 實驗材料3-1-1 實驗菌種本實驗所採用的菌株Klebsiella sp. Ana-WS5，具有發酵生產二醇類的能力，
由國立成功大學化工系張嘉修教授所提供。此菌株篩選於國立成功大學實驗所高效率生物消化系統中的污泥，經利用16S rRNA基因序列(圖3.1)與Genbank鑑定後確定菌株種類為Klebsiebllasp.，並命名為Klebsieblla sp. Ana-WS5。圖3-1 Klebsiella sp. Ana-WS53-2 實驗架構圖3-2 實驗架構Ⅰ (懸浮培養)圖3-3 實驗架構Ⅱ (固定化培養)四、結果與討論4-1 搖瓶批次發酵程序（Flask Experiments）4-1-1 不同碳源之影響此實驗為探討不同碳源對於菌體生長及BDO與PDO產量之影響。由圖4-1得知，菌體濃度以甘油為碳源時
最高，約2.3 g/L。BDO以葡萄糖為碳源時產量最高，PDO、Total Diols以甘油為碳源時最高，由於甘油能同時生產BDO與PDO，而葡萄糖主要為生產BDO。以甘油當作碳源，能得到較高的菌體濃度且由代謝路徑可知利用不同發酵策略能分別生產較高BDO與PDO。且由於現今生質柴油產量日益增加，其副產物粗甘油也大量的生產，未來以粗甘油為替代碳源將可以降低生產成本。因此，選定甘油當作後續培養所使用的碳源。圖4-1 不同碳源對菌體生長及產物產量之影響4-1-2 添加不同乳酸濃度之影響文獻指出，當以Klebsiellasp.生產BDO時，若在培養基中添加少許的代謝副產物醋酸或乙醇，會使BDO的產量有
所提升。所以本次實驗為探討添加亦是代謝副產物的乳酸在不同濃度下對菌體生長及BDO與PDO產量之影響。由圖4-2可知，效果以添加10 g/L為最好，較控制組高出30%，其BDO、PDO、Total Diols分別為26.3 g/L、10.8 g/L、37.1 g/L。此結果由圖2-1甘油代謝路徑推測當培養基中添加乳酸，由於產物濃度效應而使甘油代謝路徑向BDO，故提高BDO的產量。圖4-2 添加不同濃度的乳酸對菌體生長及BDO與PDO產量之影響4-1-3 細胞固定化之重複批次實驗本次實驗探討以海藻酸鈉為固定化載體的固定化細胞進行Repeated-Batch實驗對BDO與PDO產量之影響，每一次批次
以96小時為一個循環。由圖4-3所示，固定化細胞在第一批次到第三批次發酵實驗中，雖然主要代謝產物的產量有略微的下降，但BDO和PDO的產量分別都可以維持在20 g/L、11 g/L左右。但在第四批次實驗，凝膠球會開始破裂使菌體流出凝膠球外，推測凝膠球破裂後浸泡於培養基中，造成培養基的改變加上菌體的活性降低，導致主要代謝產物的產量下降。圖4-3 細胞固定化之重複批次實驗對BDO與PDO產量之影響4-2 5-L攪拌式發酵槽批次程序 (Batch)4-2-1 控制溶氧量之影響溶氧量高低會影響菌體的生長與甘油代謝路徑，本次實驗控制溶氧量於高DO值(70 ± 10%)與低DO值(10 ± 10%)之批
次發酵策略，來探討不同的溶氧發酵策略對菌體生長及BDO與PDO產量之影響。由圖4-4所示，在高溶氧策略下，細胞能快速生長並得到較高的菌體濃度2.7 g/L而低溶氧時的菌體濃度僅達1.7 g/L且在主要代謝產物BDO方面，高溶氧發酵和控制組的最大濃度幾乎相同約30.3 g/L，但其BDO的生產速率為0.42 g/Lh遠大於控制組的0.16 g/Lh，約2.6倍之多；於PDO方面，反而於低溶氧的狀態下是較有利於Klebsiella sp.生產PDO，因為其PDO生產速率可達0.27g/Lh是控制組0.12 g/Lh的兩倍左右。由表4-29可發現，由高低溶氧的發酵策略可以使同時生產PDO和BDO的K
lebsiella sp.對生產其中的某一產物選擇性較大，提高其中一個產物的生產量同時降低另一個代謝產物的生產，更有助於後續分離純化的步驟。圖4-4 控制溶氧量之比較4-2-2 固定pH值之影響文獻指出pH值控制於6.0~7.0是較適合Klebsiella sp.生長(Jiet al., 2011)。因此本次實驗分別將pH值控制於6.0、7.0，探討不同的pH值發酵策略對於菌體生長及BDO與PDO產量之影響，由圖4-5可發現，將pH固定於6.0、7.0時，菌體濃度最高為pH固定於7.0。固定pH會使PDO的產量和生產速率明顯的提升。當發酵過程中pH均固定於7.0時，PDO的最大濃度與生產速率能
提升至25.0 g/L、0.33g/Lh；但在BDO方面固定pH值之發酵策略無法對產量或生產速率有所幫助。雖然此方法不利於BDO的生產，但對於菌體生長和PDO生產方面卻是有不錯的進展。圖4-5 固定pH之比較4-2-3 固定時間間距調整pH之批次發酵實驗本次實驗將仿效控制組pH自然快速下降的變化來測試產物產量和生產速率的影響。培養並利用5N NaOH在固定時間間距分別為12小時和24小時調整槽內發酵液的pH值，調整為7.0，直到pH不再下降至7.0以下。由圖4-6可以發現，當pH被調整為7.0之後12小時之內即又下降，所以此方法可以有效地強迫pH產生震盪變化。實驗結果如圖4-28所示，此強迫p
H來回震盪的方法確實可以提升BDO的生產速率，但依舊無法提高BDO的產量，推測是因為碳源甘油快速地被消耗，以至於產量無法繼續提升；PDO方面，此方法跟固定pH值一樣有利於PDO的生產，甚至效果更好。比較兩種不同時間間距所得到的數據，在主要代謝產物方面，以24小時調整一次的效果比12小時調整一次較佳，因為pH值12小時內掉回5.0以下，在pH維持 5.0以下的時間會長達12小時，此環境是有利於BDO的生長，所以BDO的產量會較好。因此pH的強迫震盪是可以有效刺激BDO、PDO，提升生產速率，而不同的pH環境，更可以提升各別的產量。圖4-6 固定時間間距調整pH之比較4-3 5-L攪拌式發酵槽饋
料批次程序 (Fed-batch)4-3-1 固定時間間距調整pH之饋料批次發酵實驗由4-2-3批次實驗得到每24小時調整pH至7.0可有效的提升BDO、PDO的生產速率，但因為碳源在96小時內快速消耗，以致無法持續提升BDO的產量。因此本實驗以每24小時調整pH值之間隔式饋料批次發酵策略來改善主要代謝產物產量不佳的問題。但間隔式饋料是具有產物延遲累積的問題，並用連續式饋料作為改善。由圖4-30可會發現連續式饋料確實可改善產物延遲累積的問題，且饋料批次也能以提升主要代謝產物產量，BDO的最大濃度由14.3 g/L 增加至20 g/L，PDO也更從30.1 g/L提升至54.8 g/L。。圖4-
7 饋料批次之比較五、結論由搖瓶實驗可知，甘油可以提高菌體濃度且得到較好的Total Diols。在培養基中添加乳酸能有效提升Total Diols約30 %。而包埋法之固定化細胞重複批次實驗可以重複四次批次實驗，前三次批次BDO和PDO都可以維持在20 g/L、11 g/L；第四次批次凝膠球則會破裂。細胞固定化對產物的生產沒有提升效果但有利進行微生物細胞重複利用。5-L攪拌式發酵槽批次發酵之溶氧實驗中，高溶氧，可以獲得細胞較高的菌數量2.8 g/L、提高BDO的最大濃度30.1 g/L、生產速率0.42 g/Lh、產率0.43 g/g；低溶氧批次發酵反而有利於PDO的生產，最大濃度17.2
g/L、生產速率0.13 g/Lh、產率0.59 g/g；固定pH實驗，以pH值控制於7.0時可得較高的菌體濃度2.8 g/L、PDO的產量和生產速率明顯的提升至25.0 g/L、0.33g/Lh；固定時間間距調整pH至7.0實驗，以每24小時調整pH值至7.0相對於固定pH 7.0可有效提升BDO的生產速率(由0.13提升至0.20 g/Lh)，此方法跟固定pH值一樣有利於PDO的生產，甚至效果更好。5-L攪拌式發酵槽饋料批次發酵之固定時間間距調整pH至7.0實驗，強迫性的pH震盪有助菌體的活性，發酵液中pH的改變也可以改變甘油的代謝路徑進而提高BDO、PDO生長速率 (0.20 g/Lh、
0.42 g/Lh)，之後再利用饋料的方式，來促進BDO、PDO (20.0 g/L、54.8 g/L)產量；而兩種不同的饋料方式，差別僅於連續式饋料批次可以改善間隔式饋料批次時產物延遲生產的問題，對產物的產量並無明顯影響。參考文獻Biebl H., Zeng A.P., Menzel K., Deckwer W.D., (1998). Fermentation of glycerol to 1,3-propanediol and 2,3-butanediol byKlebsiella pneumonia. ApplMicrobiolBiotechnol, 50:24-29.Biebl H.,
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