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國立臺灣海洋大學 食品科學系 潘崇良所指導 蔡雅雲的 石花菜洋菜寡醣生理活性之探討 （2015），提出2023年兔關鍵因素是什麼，來自於石花菜、洋菜混合寡醣、抗凝血活性、抗腸病毒 71 型活性、RAW 264.7 細胞、Caco-2 細胞吸收運輸。
而第二篇論文國立臺灣海洋大學 水產養殖學系 周信佑所指導 劉興懿的 石斑魚兩種虹彩病毒主要外鞘蛋白之重組蛋白與DNA疫苗之注射及口服劑型研發 （2015），提出因為有 石斑魚、虹彩病毒、主要外鞘蛋白、重組蛋白疫苗、DNA疫苗的重點而找出了 2023年兔的解答。
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為了解決2023年兔 的問題，作者詹惟中 這樣論述：
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石花菜洋菜寡醣生理活性之探討
為了解決2023年兔 的問題，作者蔡雅雲 這樣論述：
本研究主要自石花菜 (Gelidium sp.) 產製洋菜混合寡醣及高硫酸基含量洋菜混合寡醣，探討其抗氧化、抗凝血、抗病毒、抗發炎以及於腸道吸收與運輸等之生理活性。將 0.3% 石花菜洋菜多醣 (Gelidium agar, GA) 經MA103、與 MAEF108 所產 Agarases 粗酵素液共同水解 24 hr，並區分出小於 5 kDa 之洋菜混合寡醣 (AOS5k)，經計算後每 100 g 乾燥石花菜約可產出14.85 g AOS5k，以 HPLC 與 TLC 分析初步推測 AOS5k 為聚合度 DP 2、4 及 6 之混合寡醣所組成。利用氯磺酸-二甲基甲醯胺法 (Chlorsul
fonic acid-N,N-dimethylformamide method, DMF) 將 AOS5k 之硫酸基含量自 1.69% 增加至 22.77%，並將所得高硫酸基洋菜混合寡醣命名為 AOS5k-DMF。以 FT-IR 分析 AOS5k 與 AOS5k-DMF 所得官能基圖譜，顯示在波長數 1,220-1,235 cm-1 (S=O) 與 835-845 cm-1 (C-O-S) 處有硫酸基團波峰訊號之產生。在抗氧化試驗中，當 AOS5k 及 AOS5k-DMF 濃度為 10 mg/mL 時，DPPH 自由基清除率分別為 57.46% 與 72.99%；具有相當於 50.18 與51
.27 ug/mL Trolox之還原力；呈現 50.18% 與 15.78% 之螯合亞鐵離子能力，在還原力測定實驗結果顯示吸光值 (OD700nm) 分別為 0.20 與 0.26，相當於 52.47 與 83.01 ug/mL 的 Trolox。在兔血漿抗凝血 APTT、PT、及 TT 試驗中，20 mg/mL AOS5k 與 AOS5k-DMF 與空白組相比皆能延遲凝集時間 (54-246 sec)，並降低凝集程度 (21-88%)。以小鼠巨噬細胞株 (RAW 264.7 cells) 為細胞模式探討洋菜寡醣AOS5k 與 AOS5k-DMF 之抗發炎活性分析，2 ug/mL AOS5k
以及 20 ug/mL AOS5k-DMF，能有效降低 RAW 264.7 細胞在 LPS 刺激下之 NO (24% 和 22%)、TNF-a (11%及11%)、及 IL-6 (18% 及 12%) 生成量，且與 LPS-induced 呈現顯著性差異，而只有 20 ug/mL AOS5k-DMF 相較於 LPS-induced 能提高 IL-10 之生成量 11% (顯著差異)。抗腸病毒 71 型試驗中，高硫酸基含量之 AOS5k-DMF 抗腸病毒效果較佳，於濃度 20 ug/mL 時在預防 (Prevention)、治療 (Post-infection) 與共同治療 (Co-treat
ment) 試驗中之宿主細胞之存活率可提升至 63-76%，與對照組 (41-54%) 呈現顯著性差異。AOS5k 於 Caco-2 細胞吸收運輸試驗中，當反應 0-270 min 後 AOS5k 上層液總糖濃度從 8.31 mg/mL 降至 5.12 mg/mL，下層液則會從 0 mg/mL 提升至 1.45 mg/mL，Caco-2 細胞吸收濃度約為 1.26 mg/mL，表示 AOS5k 能被 Caco-2 細胞吸收並通過細胞單層膜運輸至下層液，初步推估當反應 0-270 min 後，AOS5k 之 Caco-2 細胞吸收率約為 15.50%，運輸率約為 26.24%；另一方面，實驗結果
顯示 AOS5k-DMF 無法有效被 Caco-2 細胞吸收運輸。
石斑魚兩種虹彩病毒主要外鞘蛋白之重組蛋白與DNA疫苗之注射及口服劑型研發
為了解決2023年兔 的問題，作者劉興懿 這樣論述：
石斑魚虹彩病毒造成石斑魚苗場極大的損失，目前分離出的病毒株主要為隸屬於巨大細胞病毒屬 (megalocytivirus) 的臺灣石斑虹彩病毒 (grouper iridovirus of Taiwan, TGIV) 以及隸屬蛙病毒屬 (ranavirus) 的石斑虹彩病毒 (grouper iridovirus, GIV)。為了發展有效控制石斑虹彩病毒的策略，本論文探討溫度(物理性調控)及新式口服疫苗 (生物性調控)抑制病毒感染的功效。研究指出溫度對於兩種虹彩病毒致病性有相當的的影響，無論是TGIV或是GIV，死亡率最高的是常溫25℃的組別，高溫的32℃的死亡率反而最低，且病毒的MCP基因表
現會明顯受到抑制，因此調控溫度是可以有效控制疾病發展的重要因子。接著我們進一步開發疫苗進行生物性調控，我們選殖出TGIV以及GIV的主要外鞘蛋白全基因序列 (major capsid protein, MCP)，轉殖入原核生物的表現載體pGS21a，製作兩種虹彩病毒主要外鞘重組蛋白，經測試以18℃、0.5~1 mM IPTG誘導表現12小時，可以得到GIV以及TGIV MCP的不可溶重組蛋白。將重組蛋白免疫兔子，製作TGIV-MCP以及GIV-MCP的多株抗體。經血清學鑑定分析結果顯示，TGIV-MCP以及GIV-MCP的多株抗體並無法互相辨識，推測兩種主要外鞘蛋白沒有共同的抗原辨識位。接著將
兩種MCP重組蛋白製作成乳化疫苗，以腹腔注射免疫石斑魚，於免役後14天進行攻毒試驗，結果顯示，兩種MCP乳化重組蛋白疫苗可有效誘發石斑魚產生專一性抗血清，且對病毒保護效果可達七成以上，說明了MCP蛋白可以做為對抗虹彩病毒的候選抗原。但重組蛋白純化過程以及儲存方法需耗費過多成本，因此我們進一步開發虹彩病毒MCP DNA疫苗。我們以含有EGFP的pcDNA3建構兩種真核細胞表現MCP基因的載體，分別製作不同病毒DNA 疫苗。接著我們分別進行in vitro (GF-1細胞) 以及in vivo (斑馬魚受精卵) 的DNA疫苗表現測試，結果無論是再in vivo或是in vitro同樣皆可觀察到綠色
螢光蛋白的表現，顯示我們建構的兩種MCP表現質體可以有效的表現出目標蛋白，接著將表現質體進行三重相乳化包埋，製成口服DNA疫苗。將石斑魚苗經乳化DNA疫苗灌食口服免疫後，進行腹腔注射攻毒試驗，在攻毒後14天，統計相對存活率，結果顯示出pcDEGm有50%的保護效果，pcDETm有68%的保護效果。測試免疫魚體內的病毒增殖情形，結果顯示，病毒基因的表現量有下降，且針對MCP的抗體力價於免疫後7天以及14天皆有上升。藉由pcDETm跟pcDEGm製作DNA疫苗免疫過的石斑魚，可以有效提高抵抗TGIV以及GIV病毒的感染，最後與市售GIV不活化疫苗比較其保護效果，我們開發的雙價DNA口服疫苗抗GIV
的效果雖不如GIV不活化疫苗注射的效果，但對TGIV的保護效果優於GIV不活化疫苗，且混料投餵的方便度也優於腹腔注射的方式，如果可以更進一步提升其保護效果，未來仍有商業化的潛力。