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Aurora-A磷酸化SLAN之分子機制與細胞功能分析

為了解決roland hp-702的問題，作者萬長鑫 這樣論述：

Aurora-A是一個致癌性serine/threonine蛋白質激酶，負責調控細胞分裂期的行進。文獻顯示高量或抑制Aurora-A表現能引發cytokinesis的失敗並產生多核細胞，且Aurora-A能磷酸化細胞分裂期中軸線多個未知因子，並控制其細胞內的分佈，顯示此磷酸化及可能是Aurora-A控制cytokinesis的關鍵。為了尋找參與在cytokinesis的Aurora-A下游受質，本論文鎖定一細胞分裂期調控因子SLAN。本實驗先前的研究顯示，SLAN為一具潛力的抑癌蛋白，高量表現時會引發細胞分裂期停滯，有些細胞甚至會跳過cytokinesis進入細胞間期而造成多核細胞

。由於Aurora-A會磷酸化SLAN，因此我們便提出假說：Aurora-A是否透過磷酸化SLAN來調控cytokinesis。本論文透過分析以下幾項研究議題來測試以上假說，包括分析Aurora-A磷酸化SLAN的分子機制、確認磷酸化位點、分析此磷酸化對於細胞分裂期或cytokinesis的可能調控效應、以及其相應分子作用機制。本論文指出，Aurora-A磷酸化SLAN需要透過鷹架蛋白14-3-3來將前兩者聚集在一起，且磷酸化位點發生於T573，此磷酸化的SLAN能透過調整RhoA來控制cytokinesis的進行。總之，本論文的研究結果顯示，Aurora-A/SLAN/14-3-3為一新型的

cytokinesis調控途徑。

評估3維培養方法對羊水幹細胞的幹性和免疫抑制活性的影響

為了解決roland hp-702的問題，作者吳坦殷 這樣論述：

間葉性幹細胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)為多能性的成體幹細胞，具有分化成中胚層細胞與免疫抑制的能力，本實驗室自帶有eGFP的C57BL/6小鼠之羊水分離出數株羊水幹細胞(amniotic fluid-derived stem cells; AFSCs)並已證實此細胞具有免疫抑制能力與提高移植手術時造血幹細胞的植入率，但是卻無法減緩急性GvHD的排斥現象。MSC最常見的培養方式為二維培養，有報告指出二維培養的方式會降低MSCs的複製能力與分化能力。三維細胞培養是一種模擬細胞的原生活環境並加強細胞間交互作用的細胞培養技術，相關研究證明三維培養具有提昇MSCs抗發炎

的活性。本實驗室使用倒掛培養法與幾丁聚醣薄膜兩種方式進行AFSCs的三維球體培養，實驗結果證實球體AFSCs具有較高的免疫抑制活性，其中又以幾丁聚醣薄膜培養的AFSC球體呈現最佳的免疫抑制活性。但經過三維球體培養後AFSCs是否仍維持幹細胞的幹性和分化的特性，尚未確認。先前研究發現間葉幹細胞在經過分化時會失去其免疫調控的活性，但現今尚未有文獻報導三維培養後間葉幹細胞之免疫調控活性的變化如何，因此，本研究的目的為確定球體培養後的羊水幹細胞是否能維持其幹性胞特性與分化能力，並探討脂肪分化時三維培養對於羊水間葉幹細胞的免疫抑制活性是否具有維持的效用。實驗結果顯示: (1)在細胞擴增率表現上:二維培養

>幾丁聚醣薄膜培養>倒掛培養法；(2)在細胞生存率表現上:二維培養=幾丁聚醣薄膜培養>倒掛培養法; (3)幾丁聚醣薄膜培養的AFSC球體在Sca-1、Rex-1、Tert-1、SDF-1等幹性基因有較高的表現並會表現較高的Sca-1細胞表面分子；(4)幾丁聚醣薄膜培養法會提昇AFSC表現較高的IL-6、IL-11、M-CSF、G-CSF、GM-CSF等造血調控因子的基因；(5)在抗凋亡基因的表現上:二維培養>幾丁聚醣薄膜培養>倒掛培養法；(6)幾丁聚醣薄膜培養具有較強的脂肪與硬骨分化能力而軟骨分化能力則反之；(7)三維培養具有較高的T細胞抑制活性而幾丁聚醣薄膜培養會表現較強的PD-L1與抗發炎

因子基因；(8)三維培養並無法減弱羊水間葉幹細胞於脂肪分化過程中免疫抑制基因表現的降低。綜合以上結果，三維培養法可增加AFSC幹細胞自我更新並提昇其幹細胞特性、分化能力、與免疫調節活性，而其中以幾丁聚醣薄膜培養法表現較佳。