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蘿蔔嵌紋病毒台灣分離株 (RaMV-TW) 之分子特性分析

為了解決hola地墊的問題，作者王淨竹 這樣論述：

台灣地區栽培的十字花科作物種類繁多，為重要的蔬菜之一，但普遍受病毒病為害。2007年於苗栗大湖地區採集得疑受病毒感染之蘿蔔植株，病株葉片上有嚴重之嵌紋(mosaic)病徵，以穿透式電子顯微鏡鏡檢罹病組織粗汁液，可觀察到直徑大小約30 nm的球形病毒顆粒。以罹病組織粗汁液機械接種於奎藜(Chenopodium quinoa)進行純系分離，並以機械接種方式將純系的病毒回接至健康蘿蔔苗，發現能在蘿蔔引起葉片嵌紋、變形及畸脈贅生(enation)的病徵，証實該病毒對蘿蔔的病原性。使用Maliogka等人(2004)所發表適用於Comoviridae的簡併式引子對，以半巢式反轉錄聚合&;#37238;

鏈鎖反應(semi-nested RT-PCR)進行檢測，證實該病毒為蘿蔔嵌紋病毒(Radish mosaic virus, RaMV) ，遂以蘿蔔嵌紋病毒台灣分離株(Radish mosaic virus Taiwan isolate, RaMV-TW)為其代稱。寄主範圍測試顯示RaMV-TW能在台灣地區常見的8種十字花科作物上產生輪紋和嵌紋的病徵，感染嚴重者則會呈現葉片皺縮變形的徵狀。罹病葉片粗汁液經過淨化、PEG濃縮、以及40%蔗糖緩衝液為墊層(sucrose cushion)的超高速離心後，所得的部份純化之懸浮液內含大量直徑約30 nm的球形病毒顆粒。利用SDS-PAGE蛋白質電泳分析

，顯示所純化的病毒其具有兩種外鞘蛋白次單位(coat protein subunit)，其分子量分別約為41 kDa及25 kDa。選取目前已發表的RaMV分離株，包括: RaMV-J (AB295643和AB295644 )、RaMV-CA (AB456531和AB456532)及RaMV1 (EU450837 和EU450838)之全長度核酸基因體RNA 1及RNA 2，利用CLUSTALW 程式進行比對後，針對序列較保守的區域設計各基因的專一性引子對進行RaMV-TW全長度基因體核酸序列 RNA1及RNA2之選殖與序列解讀。RaMV-TW基因體核酸RNA1已完成6041個核&;#3352

7;酸的解序，具有單一開放讀架(ORF)，轉譯出之複合大蛋白，能被protease裂解成5個病毒功能蛋白，由5’端依序分別為Co-factor、helicase、VPg、Protease和RdRp 。RNA2已完成4012個核&;#33527;酸的解序，一樣具有單一開放讀架(ORF)，但RNA2含有兩個ATG起始碼(start codons)，根據不同的ATG起始碼能轉譯出包含4個蛋白轉譯架的複合大蛋白，由5’端依序分別為CR / MP、LCP、及SCP。將RaMV-TW基因體核酸全長序列 RNA1 (Acce. No. HM032712)及RNA2 (Acce. No. HM032711)分

別與目前已在NCBI上登錄的三個RaMV分離株及6個Comovirus屬病毒(genus Comovirus)之全長基因體RNA1和RNA2核&;#33527;酸及蛋白胺基酸序列進行比對分析，結果顯示在三個RaMV分離株中，RaMV-TW和RaMV-CA與 RaMV-J的親緣關係最為相近。